كلونينگ، بيان ژن وتخليص آنزيم CEL Iاندونوكلئاز از گياه كرفس 

چکيده:
اهداف: آنزيم I CEL يك گليكوپروتئين گياهي است كه از گياهان دسته كرفس استخراج مي شود و اولين آنزيم يوكاريوتي است كه پيوند ناجور را با يك اختصاصيت بالا در يكي از دو رشته DNA برش مي دهد. هدف از اين پژوهش كلون كردن ژن، بيان و تخليص آنزيم CEL I اندونوكلئاز و بررسي عملكرد آن بر روي ژنهاي جهش يافته در محيط آزمايشگاهي بوده است. 
مواد و روش ها: در اين تحقيق از گياه كرفس mRNA استخراج شد و سپس RT-PCR صورت گرفت و محصول به عنوان الگودر تكثير PCR مورد استفاده قرار گرفت. ژن در پلاسميد بياني pET32a ساب كلون شد و درون باكتري E.coli سويه BL2I( DE3) plysS ترانسفورم گرديد. پروموتور ژن با IPTG القا شد و با وسترن بلاتينگ مورد بررسي قرار گرفت. پروتئين با ستون كروماتوگرافي تمايلي ( S.Tag / His.Tag ) تخليص شد. همچنين فعاليت اندونوكلئازي آنزيم روي محصول PCR ژن جهش يافته و نرمال در حال بررسي مي باشد. 
يافته ها: كلونينگ ژن با موفقيت انجام شد، پروتئين نوتركيب تخليص شد و نتايج اوليه نشان دادند كه آنزيم مي تواند نواحي هترودوبلكس ژن را شناسايي كند. 
نتيجه گيري: آنزيم CEL I نوتركيب مي تواند نواحي هترودوبلكس راشناسايي نمايد. نويسنده(گان):
سولماز خليق فرد، مژگان بنده پور، وحيد رضا ياسايی، كاظم پريور، بهرام كاظمی،